بیان نوترکیب انتروتوکسین استافیلوکوکوس اورئوس تیپ B به عنوان کاندیدای واکسن
Authors
Abstract:
زمینه و هدف: استافیلوکوکوس اورئوس(Staphylococcus aureus)، کوکسی گرم مثبتی است که میتواند بیماری های مختلفی چون مسمومیتهای غذایی، شوک های مخاطره آمیز و ... را به وجود آورد. از مهمترین سموم تولید شده توسط این باکتری، انتروتوکسین نوع B یکی از معمولترین و مهمترین توکسینهای یافت شده و یک سوپر آنتی ژن می باشد. هدف از انجام این تحقیق همسان سازی و بیان این پروتئین به شکل نوترکیب جهت دستیابی به یک ساختار و منبع پایدار برای تولید آن به منظور بررسی های آینده به عنوان کاندید واکسن بود. روش بررسی: ژن seb به لحاظ وجود کدونهای نادر مورد بررسی قرار گرفت و بهینه سازی ژن با استفاده از نرم افزارهای بیوانفورماتیکی انجام شد. واکنش هضم آنزیمی برای تایید حضور ژن نوترکیب seb درون وکتور بیانی(+)pET28a انجام شد. پس از تأیید همسان سازی ژن مورد نظر، بیان نوترکیب پروتئین SEB با استفاده از القاءگر مصنوعی IPTG و همچنین تخلیص تحت شرایط طبیعی(غیردناتوره) با کمک ستون کروماتوگرافی نیکل(Ni-NTA) صورت پذیرفت. آنالیز وسترن بلات نیز برای تأیید پروتئین SEB انجام شد. یافته ها: شاخص سازگاری کدون(CAI) مربوط به ژن طبیعی 68/0 بود، درحالی که این شاخص برای ژن بهینه سازی شده به 82/0رسید. درصد کدونهای با شیوع بالا در توالی بهینه شده به 57 درصد افزایش یافت. هضم آنزیمی صحت همسانه سازی ژن seb در وکتور (+)pET28a را تائید کرد. نتایج نشان داد که همسانه سازی ژن seb درون وکتور (+)pET28a در یک جایگاه مناسب بین محلهای مورد انتظار اثر آنزیمهای برشی انجام شده بود. همچنین ژن seb بعد از القاء با IPTG بیان خوب و قابل توجهی داشت. میزان پروتئین بیان شده برای هر لیتر از محیط کشت حدود 22 میلیگرم بود. وسترن بلاتینگ، واکنش پروتئین نوترکیب با آنتی بادی ضد هیستیدین را نشان داد. نتیجه گیری: سازه نوترکیب پایدار محتوی ژن seb تولید گردید که بیان نوترکیب قابل توجهی از پروتئین را نشان داد. بنابراین پروتئین SEB را می توان در مطالعات آینده برای بررسی میزان ایمن سازی علیه سم SEB مورد بررسی قرار داد.
similar resources
کلونینگ و بیان ژن نانوبادی علیه انتروتوکسین B باکتری استافیلوکوکوس اورئوس
زمینه و هدف: باکتری استافیلوکوکوس اورئوس با ترشح انتروتوکسین‌های متعدد باعث بیماری‌های مختلف می‌شود، به همین دلیل روش‌های مؤثر و آسان شناسایی انتروتوکسینها موردنیاز است. امروزه غالباً از روش‌های ایمونوشیمیایی برمبنای آنتی‌بادی‌های مونوکلونال استفاده می‌شود. در سرم خون خانواده شترسانان آنتی‌بادی‌های زنجیره سنگین یافت شده که VHH یا نانوبادی نامیده می‌شوند. خصوصیات منحصربه‌فرد این آنتی‌بادی‌ها از ...
full textبیان و تخلیص پروتئین نوترکیب انتهای کربوکسیل نوروتوکسین بوتولینوم A در باکتری اشریشیاکلی به عنوان کاندیدای تولید واکسن بوتولیسم
چکیده زمینه و هدف: بوتولیسم بیماری کشنده‌ای است که توسط نوروتوکسین یکی از هفت نوع کلستریدیوم بوتولینوم ایجاد می‌شود. بخش کربوکسیل زنجیره سنگین نوروتوکسین کلستریدیوم بوتولینوم تیپ A(BoNT/A-Hc)، از قابلیت بالایی در تحریک سیستم ایمنی برخوردار است که امروزه برای تولید واکسن نوترکیب علیه بوتولیسم به کار می‌رود. هدف از این پژوهش بیان و تخلیص فرم محلول این بخش از نوروتوکسین در باکتری اشریشیاکلی نوترک...
full textطراحی و ساخت نانو زیست ذرات فاژی نوترکیب به عنوان کاندیدای حامل واکسن ژنی- خوراکی
Background and Objective : Bacteriophage vectors recently have been considered as a gene transfer and vaccine delivery vehicles chiefly due to their low cost, safety, and physical stability. Since, little is known about phage mediated gene transfer in mammalian hosts, A group of invitro experiments were performed to ascertain gene transfercapability of these vehicles . Materials and Methods...
full textشیوع سویه‌های استافیلوکوکوس اورئوس مقاوم به متی‌سیلین مولد انتروتوکسین A و B
Background: Staphylococcus aureus is a gram positive coccus which is able to cause different kinds of infection in certain condition. The function of this bacteria is to provide the conditions for the invasion of it to the host with the secretion of different sorts of toxins such as Staphylococcus aureus enterotoxin, including important virulence factors that super antigens are all factors dige...
full textشناسایی انتروتوکسین تیپ a استافیلوکوکوس اورئوس در مواد گوشتی خام به روش pcr
خلاصه استافیلوکوکوس اورئوس شایع¬ترین عامل بیماری¬های ناشی از موادغذایی است. استافیلوکوکوس اورئوس تولید¬کننده طیفی از انتروتوکسین¬ها بوده که عامل مسمومیت¬های غذایی می¬باشند. تیپ a این انتروتوکسین¬ها یکی از مهم¬ترین عوامل گاستروانتریت است. هدف از این مطالعه، بررسی آلودگی نمونه-های گوشت خام جمع¬آوری شده از فروشگاه¬های سطح شهر تهران به استافیلوکوکوس اورئوس کدکننده انتروتوکسین تیپ a می¬باشد. در ای...
My Resources
Journal title
volume 16 issue 6
pages 653- 664
publication date 2018-01-21
By following a journal you will be notified via email when a new issue of this journal is published.
Hosted on Doprax cloud platform doprax.com
copyright © 2015-2023